Toutes les mycobactéries produisent de la niacine (ou acide nicotinique), précurseur de la biosynthèse du NAD. En raison d’une voie métabolique bloquée, certaines bactéries produisent en excès et excrètent la niacine pendant leur croissance in vitro.
Le résultat est positif pour M. tuberculosis, quelquefois M. africanum et pour certaines mycobactéries non tuberculeuses (M. simiae, M. marinum, M. chelonae et M. abscessus).
Ce test, peu onéreux, est associé à la recherche de la nitrate réductase pour identifier l’espèce M. tuberculosis chez les souches appartenant au complexe tuberculosis.
Comme la niacine doit être en quantité suffisante pour être détectée, ce test est rarement réalisable sur les primocultures, il faut des subcultures (= repiquages de la primoculture).
Il se déroule en deux étapes :
Principe
Dans un premier temps, le cycle de l’acide nicotinique est rompu au moyen du bromure de cyanogène. L’aldéhyde produit réagit ensuite avec une amine aromatique, l’aniline, pour donner, après action de la lumière, une coloration jaune.
Technique
Une réaction positive se traduit par une coloration jaune
Remarque : les réactifs utilisés pour cette méthode sont toxiques.
Informations de sécurité selon le GHS (Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals)
Cette technique utilise des bandelettes imprégnées de thiocyanate de potassium, de chloramine T, d’acide citrique et d’aminosalicylate de sodium.
Après avoir plongé la bandelette dans l’extrait, le thicoyanate réagit en milieu acide avec la chloramine T pour former du chlorure de cyanogène. Ce dernier donne une coloration en jaune en présence de niacine.
BBL commercialise ce type de bandelette (BBL Taxo) ainsi que des disques imprégnés de nicotinamide comme contrôle positif.
Technique du test BBL Taxo (extrait de la fiche technique)
Le test est lu comparativement à un contrôle positif et un contrôle négatif. La préparation de ces contrôles est présentée plus loin.
Préparation des contrôles
Contrôle positif
Contrôle négatif
Un témoin négatif est préparé en ajoutant 0,6 mL du même diluant à un tube à essai de 13 x 75 mm à la place de l’extrait.
Les mycobactéries possédant une nitrate réductase réduisent les nitrates de sodium en nitrites après deux heures d’incubation.
(1) Solutions de nitrates NaNO3 0,850 g | (2) Réactifs de GRIESS Réactif I : Acide sulfanilique 0,8 g |
Recouvrir de 2 mL de solution de nitrate une culture pure de mycobactéries sur LJ âgée de 2 semaines ou plus, puis mettre à l’étuve pendant 2 heures (37°C).
Ajouter 0,3 mL de réactif I puis 0,3 mL de réactif II.
Le test est positif s’il apparait une coloration rouge/framboise vif.