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Gélose chocolat enrichie

La gélose chocolat enrichie est un milieu d’isolement non sélectif, utilisé pour la culture de bactéries exigeantes comme les Neisseria, Haemophilus et Streptococcus pneumoniae. Elle est tout particulièrement adaptée pour l’analyse des sécrétions bronchopulmonaires, des prélèvements ORL, des liquides céphalorachidiens, des hémocultures.

Au cours de sa préparation, l’hémoglobine contenue dans ce milieu lui donne pendant un temps une teinte rouge. La couleur du milieu vire ensuite au marron après l’autoclavage. Couleur qui lui vaut son nom de « gélose chocolat ».

Pour convenir à la culture des bactéries exigeantes, un supplément polyvitaminique est introduit au cours de sa préparation. Le nom de ce supplément varie selon les fabricants, il se nomme par exemple « polyvitex » pour bioMérieux.

Ainsi l’hémoglobine apporte le facteur X (hémine) et le polyvitex apporte le facteur V (NAD) nécessaires, tous les deux, à la culture d’Haemophilus influenzae.

Certaines bactéries exigeantes cultivées sur ce milieu exigent une atmosphère enrichie en CO2, les cultures sur ce milieu sont donc systématiquement incubées en atmosphère enrichie en CO2.

Composition gélose chocolat enrichie
Peptone de caséine (bovin)7,5 g
Peptone de viande (bovin ou porcin)7,5 g
Amidon de maïs1,0 g
Phosphate dipotassique4,0 g
Chlorure de sodium5,0 g
Hémoglobine (bovin)10,0 g
Supplément vitaminique comme le polyvitex10 mL
Agar10,0 g
pH = 7,2
Eau distilléeqsp 1 L

 

Composition du supplément « Polyvitex »
Chlorhydrate de cystéine25,0 g
L-cystine1,10 g
Chlorhydrate de guanine0,03 g
Chlorhydrate de thiamine0,003 g
Thiamine pyro-phosphate0,1 g
NAD0,25 g
Nitrate ferrique0,02 g
Acide para-amino-benzoïque0,02 g
Adénine1,0 g
L-glutamine10,0 g
Vitamine B120,01 g
Glucose100 g
Eau distilléeqsp 1 L

 

Ce milieu non sélectif convient bien sûr aux bactéries non exigeantes. Ces dernières auront tendance à former des colonies plus volumineuses que celles des bactéries exigeantes.

 

Exemples de cultures avec différentes espèces

Chocolat Haemophilus influenzaeCulture d’Haemophilus influenzae
sur gélose Chocolat + polyvitex
24h à 37°C en atmosphère enrichie en CO2
Chocolat Escherichia coliCulture d’Escherichia coli
sur gélose Chocolat + polyvitex
24h à 37°C en atmosphère enrichie en CO2

Chocolat Enterobacter aerogenesCulture d’Enterobacter aerogenes
sur gélose Chocolat + polyvitex
24h à 37°C en atmosphère enrichie en CO2

Chocolat Pseudomonas aeruginosaCulture de Pseudomonas aeruginosa
sur gélose Chocolat + polyvitex
24h à 37°C en atmosphère enrichie en CO2

Chocolat Klebsiella oxytoca
Culture de Klebsiella oxytoca
sur gélose Chocolat + polyvitex
24h à 37°C en atmosphère enrichie en CO2

 

Chocolat fluidifiat crachatLa photo de gauche correspond à une culture sur gélose chocolat + polyvitex ensemencée par étalement de 100 µL d’une dilution à 10-4 d’un crachat.

La boite a ensuite été placée 24h à 37°C sous atmosphère enrichie en CO2.

On observe 3 types de colonies :

  • N°1 = Haemophilus influenzae
  • N°2 = Streptococcus pneumoniae
  • N°3 = Staphylococcus aureus

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